体外实验证实瑞德西韦和氯喹可抑制新型冠状病毒

瑞德昔韦最近被公认为是针对培养细胞，小鼠和非人类灵长类动物（NHP）模型中的多种RNA病毒（包括SARS / MERS-CoV5）感染的有前途的抗病毒药物。目前正在临床研究中，用于治疗埃博拉病毒感染。瑞德昔韦是一种腺苷类似物，可整合到新生的病毒RNA链中并导致过早终止。我们的加药时间分析显示瑞德昔韦在病毒进入后的一个阶段起作用（图1c，d），这与其作为核苷酸类似物的推定抗病毒机制是一致的。沃伦等的结果表明，在NHP模型中，静脉内施用10 mg / kg剂量的瑞德昔韦可导致其活性形式在血液中持续存在（10μM），并提供100％的抗埃博拉病毒感染保护作用。我们的数据表明瑞德昔韦在Vero E6细胞中针对2019-nCoV的EC90值为1.76μM，这表明在NHP中可能达到其工作浓度。我们的初步数据（补充信息，图S2）表明，瑞德昔韦还可以有效抑制人细胞系（人肝癌Huh-7细胞）中的病毒感染，该细胞系对2019-nCoV.2敏感。

氯喹是一种广泛使用的抗疟疾和自身免疫性疾病药物，最近被报道为潜在的广谱抗病毒药物。8氯喹通过增加病毒/细胞融合所需的内体pH值以及干扰来阻断病毒感染，同时也能干扰SARS-CoV受体的糖基化反应。我们的添加时间分析表明，氯喹在Vero E6细胞中2019-nCoV感染的进入和进入后阶段均起作用（图1c，d）。除了其抗病毒活性外，氯喹还具有免疫调节能力，可在体内协同增强其抗病毒作用。口服后，氯喹广泛分布于整个身体，包括肺。氯喹对Vero E6细胞中2019-nCoV的EC90值为6.90μM，这在风湿性关节炎患者接受500毫克给药的血浆中可证明是临床上可实现的。氯喹是一种便宜且安全的药物使用了70多年，因此，它可能在临床上适用于2019-nCoV。

我们的发现表明，瑞德昔韦和氯喹在体外控制2019-nCoV感染方面非常有效。由于这些化合物已用于人类患者，并具有安全跟踪记录，还显示出对各种疾病的有效效果，因此我们建议应在患有新型冠状病毒疾病的人类患者中对它们进行评估。

                                                                                                  

测试药物在体外对2019-nCoV的抗病毒活性。在不同剂量的所示抗病毒药物治疗中，将Vero E6细胞以MOI为0.05水平的2019-nCoV进行感染，持续48小时。然后通过qRT-PCR测定细胞上清液中的病毒产量。通过CCK-8测定法测量了这些药物对Vero E6细胞的细胞毒性。图a的左和右Y轴分别代表对病毒产量的抑制和药物的细胞毒性的平均％。实验一式三份进行。 图b为使用瑞姆昔韦和氯喹后病毒感染的免疫荧光显微镜检查。如上所述药物治疗有效。感染后48 h，固定感染的细胞，然后用兔血清针对蝙蝠SARS相关CoV的NP作为一抗，并用Alexa 488标记的山羊抗兔IgG（1：500; Abcam）作为二抗。细胞核用赫斯特染料染色。条为100μm。 图c和d为瑞地昔韦和氯喹的添加时间实验。对于“全过程治疗”，将Vero E6细胞用药物预处理1小时，然后添加病毒使其附着2小时。之后，去除病毒和药物的混合物，并用含药物的培养基培养细胞，直到实验结束。对于“进入治疗”，在病毒附着前将药物添加到细胞中1小时，然后在p.i. 2 h，将病毒-药物混合物替换为新鲜培养基，并保持到实验结束。对于“进入后”实验，药物在p.i. 2 h加入，并保持到实验结束。对于所有实验组，将细胞用2019-nCoV感染，MOI为0.05，并通过qRT-PCR c测量感染细胞上清液中的病毒产量，并在14 h p.i时通过Western blot d分析感染细胞中的NP表达。